酵母雙雜交系統(tǒng)研究蛋白質(zhì)相互作用的方法
日期：2023-06-07 14:05:46
酵母雙雜交系統(tǒng)是研究蛋白質(zhì)相互作用的方法，它利用酵母細(xì)胞內(nèi)的轉(zhuǎn)錄因子結(jié)構(gòu)域來(lái)檢測(cè)蛋白質(zhì)—蛋白質(zhì)相互作用。
酵母雙雜交系統(tǒng)的基本原理是利用酵母雙雜交鑒定（Y2H）法進(jìn)行篩選。該方法利用酵母細(xì)胞中的兩個(gè)分子，一個(gè)稱(chēng)為“魚(yú)鉤”，它需要連接到目標(biāo)蛋白質(zhì)的N末端，另一個(gè)稱(chēng)為“誘餌”，它需要連接到目標(biāo)蛋白質(zhì)的C末端。當(dāng)魚(yú)鉤和誘餌連接時(shí)，它們會(huì)組成一個(gè)轉(zhuǎn)錄激活因子的功能性域，從而激活一些下游基因的轉(zhuǎn)錄。
酵母雙雜交系統(tǒng)研究蛋白互作步驟如下：
1、構(gòu)建酵母表達(dá)載體：將誘餌基因和魚(yú)鉤基因克隆到不同的酵母表達(dá)載體中。
2、轉(zhuǎn)化酵母細(xì)胞：將誘餌表達(dá)載體和魚(yú)鉤表達(dá)載體同時(shí)轉(zhuǎn)化到同一株酵母細(xì)胞內(nèi)。
3、篩選陽(yáng)性菌落：在選擇培養(yǎng)基上生長(zhǎng)細(xì)胞，檢測(cè)是否出現(xiàn)了青白色小菌落。
4、鑒定蛋白質(zhì)相互作用：通過(guò)對(duì)篩選出的菌落進(jìn)行進(jìn)一步的測(cè)試和驗(yàn)證，確定哪些蛋白質(zhì)相互作用。
酵母雙雜交系統(tǒng)有許多優(yōu)點(diǎn)：
1、快速：該方法能夠快速、高通量地篩選蛋白質(zhì)相互作用。
2、靈敏：檢測(cè)蛋白質(zhì)—蛋白質(zhì)交互作用所需的電信號(hào)很小，因此酵母雙雜交系統(tǒng)通常能夠檢測(cè)到相互作用的形成。
3、特異性：酵母雙雜交系統(tǒng)能夠特異地識(shí)別蛋白質(zhì)相互作用，避免假陽(yáng)性結(jié)果的出現(xiàn)。
