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使用RNA pulldown試劑盒后,剩余的RNA樣本該如何保存以留作后續實驗?

日期:2025-11-18 10:19:45

    剩余RNA樣本需在抑制RNase降解的條件下保存,短期(≤1周)可-20℃冷藏,長期(>1周)需-80℃分裝凍存,避免反復凍融,同時需搭配RNA保護劑或無酶環境。
 
一、保存前的關鍵預處理
    去除殘留污染物:若樣本含試劑盒殘留的蛋白、鹽離子等,需通過酚-氯仿抽提或柱式純化法純化RNA,避免影響后續實驗。
    確保RNA完整性:保存前可通過瓊脂糖凝膠電泳或Nanodrop檢測RNA純度(A260/A280≈1.8-2.1)和完整性,避免保存降解樣本。
    選擇合適保存液:優先溶于RNase-free水或TE緩沖液(pH8.0),也可加入RNA保護劑(如RNAlater),抑制RNase活性。
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二、分場景保存方法
    短期保存(1周內使用):將純化后的RNA分裝至無酶離心管,加入適量保存液,-20℃冷藏。此條件適合快速后續實驗(如RT-PCR、Northernblot),避免長期凍融損傷。
    長期保存(超過1周或長期備份):將RNA分裝為小體積(10-50μL/管),避免反復凍融,放入-80℃冰箱。可加入甘油(終濃度10%-20%)提升穩定性,或置于液氮中超低溫長期存儲(適合珍貴樣本)。
    避免不當保存方式:嚴禁室溫放置超過1小時,不可直接暴露于空氣或反復凍融(每次凍融都會導致RNA斷裂降解)。
 
三、保存后的復蘇與驗證
    復蘇時快速解凍:從-80℃取出后,立即置于冰上快速融化,避免室溫緩慢解凍導致RNase激活。
    復蘇后質量檢測:使用前需重新檢測RNA純度和完整性,若出現降解(如電泳條帶模糊、A260/A280異常),需重新提取或放棄使用。