小鼠趨化因子CXCL12 elisa檢測試劑盒
日期：2023-05-26 11:05:28
小鼠趨化因子CXCL12在多個生理和病理過程中發(fā)揮重要作用。ELISA（Enzyme-linked immunosorbent assay）是目前常用的測定小鼠CXCL12含量的方法之一。本文將介紹小鼠CXCL12 ELISA檢測試劑盒的操作步驟及相關(guān)實(shí)驗注意事項。
1、實(shí)驗材料：
(1) 小鼠CXCL12 ELISA檢測試劑盒（如武漢華美生物公司提供的）
(2) 小鼠血清或其他組織液體樣品
(3) 標(biāo)準(zhǔn)品（小鼠CXCL12蛋白標(biāo)準(zhǔn)，如cusabio公司提供的）
(4) PBS緩沖液
(5) HRP發(fā)光底物
(6) 阻斷溶液
(7) ELISA微孔板、洗滌緩沖液
(8) 離心管、移液器等通用實(shí)驗室工具
2、實(shí)驗步驟：
(1) 標(biāo)準(zhǔn)品制備
將標(biāo)準(zhǔn)品按照說明書中的濃度序列稀釋至不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)曲線系列，例如：0pg/mL、15.6pg/mL、31.3pg/mL、62.5pg/mL、125pg/mL、250pg/mL、500pg/mL、1000pg/mL。將各個濃度的標(biāo)準(zhǔn)品分別加入微孔板中，不同濃度樣品均加入三個重復(fù)孔位，最后一個空孔位作為陰性對照。
(2) 樣品處理
將收集好的小鼠血清或其他組織液體樣品按照說明書要求預(yù)處理，如需去除紅細(xì)胞、脂類等可以離心處理，再進(jìn)行適當(dāng)?shù)南♂屩梁线m的濃度。每個樣品加入三個重復(fù)孔位。
(3) 添加試劑
將阻斷溶液加入微孔板中，室溫靜置30分鐘，然后倒掉溶液，用PBS緩沖液進(jìn)行洗滌，使微孔板反復(fù)洗滌3次。將標(biāo)準(zhǔn)品和樣品加入微孔板中，室溫下靜置2小時或過夜。每個孔位添加樣品或標(biāo)準(zhǔn)品100μL。
(4) 洗滌步驟
在每一步操作結(jié)束后，使用洗滌緩沖液洗滌微孔板，使微孔板反復(fù)洗滌3次，每次洗滌時間為30秒。
(5) 加入HRP發(fā)光底物
將HRP發(fā)光底物加入每個孔位中，室溫下靜置30-60分鐘，避免陽性信號過強(qiáng)。每個孔位添加100μL。
(6) 讀板
使用ELISA檢測試劑盒所配套的酶標(biāo)儀測量各個孔位的吸光度值，記錄并分析實(shí)驗結(jié)果。
3、實(shí)驗注意事項
(1) 操作前將試劑室和實(shí)驗臺消毒，保持干凈整潔；
(2) 嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行實(shí)驗，特別是樣品預(yù)處理和試劑使用量；
(3) 操作中嚴(yán)格控制反應(yīng)時間和溫度，避免操作時間過長導(dǎo)致數(shù)據(jù)誤差；
(4) 操作時盡量避免振蕩或震動，以免影響實(shí)驗結(jié)果；
(5) 實(shí)驗過程中如有異常情況出現(xiàn)，應(yīng)及時調(diào)整實(shí)驗條件，確保實(shí)驗結(jié)果可靠。
4、結(jié)論
小鼠CXCL12 ELISA檢測試劑盒是一種常用的檢測小鼠CXCL12含量的方法，通過本文介紹的操作步驟可以準(zhǔn)確測定小鼠CXCL12的含量，并為相關(guān)疾病的研究提供實(shí)驗基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。
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