檢測試劑
elisa試劑盒讀數前振蕩板孔的目的及操作參數,時間、速度?
在ELISA實驗中,讀數前對板孔進行振蕩是確保檢測結果準確性和重復性的關鍵步驟之一。其核心目的是消除板孔內反應體系的不均一性
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elisa試劑盒檢測樣本時為何需要做稀釋對照?怎么避免鉤狀效應?
在 ELISA(酶聯免疫吸附試驗)檢測中,稀釋對照和避免鉤狀效應是保證結果準確性的關鍵環節。以下從原理、作用及解決方案兩方面
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RNA 質量控制:確保提取的 RNA 質量高、完整性好,避免 RNA 降解。在實驗過程中,要嚴格遵守 RNA 操作規范,使用無 RNase的試劑和耗材
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定性分析:通過 Western blot 檢測,可以確定已知蛋白質是否與目標 RNA 相互作用。將洗脫得到的蛋白質樣品進行 SDS - PAGE電泳
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可以檢測多種物質,包括蛋白質、多肽、激素、細胞因子、病毒抗原、抗體等。例如,用于檢測乙肝病毒表面抗原、艾滋病病毒抗體、腫瘤標志物如甲胎蛋白、癌胚抗原等。
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加樣時要使用經過校準的移液器,確保加樣量準確。加樣速度要適中,避免產生氣泡,防止樣本飛濺到孔壁或孔外。對于不同的試劑,要使用不同的移液器吸頭,避免交叉污染。
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優點包括特異性強、靈敏度高、操作相對簡便、可同時檢測多個樣本、結果易于觀察和分析等。缺點是需要使用特定的儀器設備,對實驗操作人員的技能要求較高。
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可能的原因包括樣本問題,如樣本采集不當、保存時間過長或保存條件不當、樣本被污染等;試劑問題,如試劑盒過期、試劑保存不當導致失效 、試劑配制錯誤等。
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洗板的作用是去除未結合的抗原、抗體和其他雜質,減少非特異性反應,提高檢測的特異性和準確性。洗板時一般使用洗板機,按照試劑盒說明書的要求設置洗板參數,包括洗滌次數、洗滌液體積和浸泡時間等。
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溫育的目的是為抗原 - 抗體反應提供適宜的溫度和時間條件,使特異性結合充分進行。溫育過程中要嚴格控制溫度和時間,一般使用恒溫培養箱或水浴鍋進行溫育。
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