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怎么確保純化蛋白的生物活性?

日期:2025-05-16 14:08:41

    表達階段:
        低溫誘導(如 18℃)減少錯誤折疊,添加共表達伴侶蛋白(如 PDI)促進二硫鍵形成。
        分泌表達至培養基(如酵母 / 哺乳動物細胞),避免胞內降解。
    純化階段:
        緩沖液含穩定劑(如 5% 甘油、1mM DTT),維持 pH 6.5-7.5。
        膜蛋白使用溫和去垢劑(如 n-Dodecyl-β-D-maltoside)保持天然構象。
    活性檢測:
        酶類:熒光底物法(如糜蛋白酶活性檢測,比活性>1000 U/mg)。
        受體 - 配體結合:SPR 檢測 KD 值(如 IL-6 與其受體結合親和力<1nM)。