wb蛋白實驗二抗的原理

日期：2023-06-14 13:36:46

WB（Western Blotting）免疫印跡法，常用于檢測蛋白質的方法。通過將蛋白樣品進行電泳分離，在聚丙烯酰胺凝膠上形成蛋白條帶，再將這些條帶轉移到毛細管膜或硝酸纖維素膜上，然后使用特異性抗體檢測目標蛋白質。其中，二抗作為特異性檢測的關鍵之一，其原理如下：

1、二抗的來源
首先要了解的是，抗體分為多克隆抗體PAbs（polyclonal antibodies）和單克隆抗體MAbs（monoclonal antibodies）兩種。與PAbs相比，MAbs具有更高的親和力和特異性，并且價格更昂貴。因此，在實驗中，一般會使用一種來自于另一種物種的抗體作為二抗來檢測主抗體。例如，當主抗體是小鼠來源的MAb時，可以使用兔子或羊的PAbs作為二抗；反之亦然。

單克隆抗體

2、二抗的結構
二抗的結構與主抗體相同，都由免疫球蛋白Ig（immunoglobulin）分子組成。Ig分子包括兩個相同的輕鏈和兩個相同的重鏈，其中重鏈可分為α、β、γ、δ、ε和μ等亞型。在哺乳動物中，IgG是最常用的二抗，因為它具有高度的特異性、親和力和穩定性。

3、二抗的作用機制
二抗與主抗體結合的方式與主抗體與目標蛋白質結合的方式相似，都是通過雙特異性的Fab段（抗原結合片段）實現的。當主抗體與目標蛋白質結合后，由于其Fc段（晶體片段）可以誘導免疫系統產生反應，因此會生成許多抗體，其中就包括以主抗體為抗原的抗體（即次級抗體）。這些次級抗體在某種程度上具有與主抗體相同的特異性和親和力，因此可以作為二抗來檢測主抗體。

4、二抗的選擇和使用
在選擇二抗時，需要考慮其與主抗體來源不同、亞型不同并且結合特異性高的特點。同時也要注意避免主抗體與二抗來源動物的內源性蛋白發生交叉反應。在使用二抗時，需要將其稀釋至適當的濃度，并進行陰性對照（即只加主抗體或只加二抗）和陽性對照（即加有目標蛋白的細胞提取物），以確保實驗的準確性和穩定性。

二抗作為WB分析中的重要組成部分，可以在實驗中大大提高檢測的敏感性和特異性，進而為科研工作者提供更準確的實驗結果。