gapdh作為WB內(nèi)參大小需要多少濃度的分離膠？
日期：2023-06-12 14:13:21
GAPDH（Glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase）內(nèi)源性蛋白質(zhì)，在Western Blot（簡稱WB）實(shí)驗(yàn)中常被用作內(nèi)參，以對(duì)待測蛋白的表達(dá)量進(jìn)行校正。而WB實(shí)驗(yàn)中的分離膠濃度，通常由蛋白質(zhì)的分子量和研究需要決定。
目前常用的SDS-PAGE體系，根據(jù)不同的要求一般有兩種類型的分離膠：T分離膠和U分離膠。其中，T分離膠適用于分子量在10-250 kDa之間的蛋白質(zhì)，而U分離膠適用于分子量在5-100 kDa之間的蛋白質(zhì)。
針對(duì)您的問題，GAPDH的分子量約為36 kDa，因此在使用T分離膠的情況下，通常推薦將分離膠的濃度設(shè)定在10%-12、5%之間，以保證GAPDH能夠充分地被分離并且呈現(xiàn)出較好的帶狀。而在使用U分離膠的情況下，通常建議將分離膠的濃度設(shè)定在12、5%以上，以確保GAPDH的帶能夠顯著地與其它蛋白質(zhì)的帶進(jìn)行區(qū)分。
以上的建議僅僅是一個(gè)參考值，實(shí)際的分離膠濃度還需要根據(jù)具體的實(shí)驗(yàn)?zāi)康暮驮囼?yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行調(diào)整。此外，在WB實(shí)驗(yàn)中使用內(nèi)參時(shí)，一定要注意它的表達(dá)水平和是否穩(wěn)定，以避免誤差的產(chǎn)生。
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