cleaved parp1單克隆抗體制備的步驟方法

日期：2023-05-10 14:46:42

PARP1在DNA修復和轉錄調節(jié)等生物學過程中發(fā)揮重要作用的蛋白質。在細胞凋亡中，PARP1 被激活的半胱氨酸蛋白酶 caspase3 和 caspase7 水解，導致 PARP1 的 N端被裂解，并釋放出具有死亡啟動功能的 24kDa 片段。因此，cleaved PARP1 (裂解的PARP1) 成為了診斷細胞凋亡的重要分子標志物。

parp1抗體

單克隆抗體是一種高度特異性、高親和力的蛋白質，很適合用于檢測 cleaved PARP1 的表達。下面將介紹一種制備 cleaved PARP1 單克隆抗體的方法。

1. 免疫原的制備
①收集培養(yǎng)好的人類細胞，如 HeLa 細胞。
②將細胞洗滌并暴露在低滲肝素鹽水（PBS）中。
③使用液氮的冷凍-溶解技術以及機械壓碎法來裂解細胞，得到裂解物的混合物。
④使用蛋白質電泳和透析技術從混合物中純化出 cleaved PARP1，然后用凈化后的蛋白質制備成免疫原。

2. 免疫動物
  ①給小鼠注射 cleaved PARP1 免疫原。按照以下方式進行注射：首先，將免疫原混合物與免疫佐劑混合，然后經(jīng)皮下、肌肉或靜脈注射到小鼠體內。
  ②在一段時間內反復注射免疫原，以便免疫系統(tǒng)能夠產(chǎn)生免疫反應。殺死小鼠并收集其脾臟，以制備免疫球蛋白。

3. 單克隆抗體制備
  ①從脾臟細胞中分離出單個 B 細胞，該細胞會產(chǎn)生特定的抗體。
  ②將單個 B 細胞與癌細胞融合，得到雜交瘤細胞。
③將這些雜交瘤細胞在培養(yǎng)基中培養(yǎng)，并篩選出產(chǎn)生免疫球蛋白的雜交瘤細胞。
④對產(chǎn)生的免疫球蛋白進行鑒定，挑選特異性強、抗原親和力高的雜交瘤細胞，以制備單克隆抗體。

單克隆抗體